Thesis Details

Siraz (Capoeta umbla)`ın karaciğer dokusundan glutatyon s-transferaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi = Purification and characterisation of glutathion s-transferase enzyme from liver tissue of Siraz (Capoeta umbla) and investigation of the effects of some chemicals on enzyme activity

Authors:

Duran, Galip

Publisher:

Ağrı İbrahim Çeçen Üniversitesi

Main Topics:

Biochemistry | Chemistry & allied sciences

Document Type:

Thesis

Program Type:

Master

Publication Date:

12/2018

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000000472

Descriptors:

Abstract

Glutathione S-transferase (GST; EC 2.5.1.18) enzyme plays an important role in detoxification in metabolism. Decrease in GST enzyme activity for any reason causes detoxification mechanism to decrease. In this study, GST enzyme was purified by affinity chromatography from liver tissue of liver of Siraz fish by 55.16 times with 36.1 EU / mg protein specific activity and 73.6% yield. The purity of the purified enzyme was checked by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight was calculated to be approximately 28,6 kDa. The optimum pH of the enzyme was 7.5, the stable pH was 6,5, the optimum ionic strength was 100 mM K-phosphate and finally the optimum temperature was 35 ° C. In addition, the KM constant for the GSH substrate was 0.168 mM and the Vmax constant was 0.166 EU / ml, the KM constant for the CDNB substrate was 1.179 mM and the Vmax constant was 0.979 EU / ml. Finally, the activity of inhibition of pesticides such as esfenvalerate, deltamethrin, cypermethrin, diniconazole, and atrazine was investigated with the metal ions such as Se2-, Ba2+, Cu2+, Ag+, and Pb2+on the GST enzyme purified from liver tissue from Siraz Fish and IC50 values and Ki constants were calculated.

Glutatyon S-transferaz (GST; EC 2.5.1.18) enzimi metabolizmadaki detoksifikayonda önemli bir yer tutar. GST enzim aktivitesinin herhangi bir nedenle azalması detoksifikasyon mekanizmasının düşmesine neden olur. Bu tez çalışmasında GST enzimi Siraz Balığı karaciğer dokusundan afinite kromatografisi ile 36,1 EÜ/mg protein spesifik aktivite ve %73,6 verim ile 55,70 kat saflaştırılabilmiştir. Saflaştırılan enzimin saflık derecesi SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapılarak kontrol edilmiştir. Molekül ağırlığı yaklaşık 28,6 kDa olarak hesaplanmıştır. Enzimin optimum pH'sı 7,5, stabil pH'sı 6,5, optimum iyonik şiddeti 100 mM K-fosfat ve son olarak optimum sıcaklığı 35 °C olarak hesaplanmıştır. Bunun yanı sıra GSH substratı için KM sabiti 0,168 mM ve Vmax değeri 0,166 EÜ/ml, CDNB substratı için KM sabiti 1,179 mM ve Vmax değeri 0,979 EÜ/ml olarak hesaplandı. Son olarak Siraz Balığı karaciğer dokusundan saflaştırılan GST enzimine Se-2, Ba+2, Cu+2, Ag+, ve Pb+2 gibi metal iyonları ile esfenvalerate, deltamethrin, cypermethrin, diniconazole ve atrazine gibi pestisitlerin inhibisyon etkisi incelendi ve bu pestisit ile metal iyonlarının IC50 değerleri ve Ki sabitleri hesaplandı.