Thesis Details

İnci kefali balığının böbrek dokusunda glutatyon s-transferaz enziminin saflaştırılması ve enzimin aktivitesi üzerine bazı kimyasalların etkilerinin araştırılması = Purification of the enzyme glutathione s-transferase in the kidney tissue of İnci Kefali fish and the effects of some chemicals on enzyme activity

Authors:

Yilmaz, Ayşe

Publisher:

Ağrı İbrahim Çeçen Üniversitesi

Main Topics:

Biochemistry

Document Type:

Thesis

Program Type:

Master

Publication Date:

12/2018

Document Language:

Turkish

Document ID (Org No.):

2000000409

Descriptors:

BIOCHEMISTRY

Abstract

In this study, GST (EC.2.5.1.18) enzyme was purified from Pearl Mullet (Chalcalburnustarichi) kidney tissue. Effects of high toxicity methyl mercury, some heavy metal ions and pesticides on purified GST enzyme activity were investigated. Purification was carried out in two stages: homogenate preparation and Glutathione-Agarose affinity chromatography. Enzyme activity was measured spectrophotometrically monitoring the increase in absorbance at 340 nm according to Awasthi method. The enzyme was purified 335-fold in a 89% yield. SDS-PAGE was performed to check the purity of the enzyme. Km and Vmax values for each substrate of the purified enzyme were studied. For GSH substrate, Km: 0.276 mM, Vmax was determined as 0.161 EU / ml, for CDNB substrate, Km: 0.429 mM, CDNB Vmax was determined as 0.207 EU / ml. The IC50 values of Cu2+, Cr3+, Zn2+, Fe3+, Mg2+, methyl mercury, atrazine, diniconazole and methomyl that affect enzyme activity are 2,4 μM-1,5 μM-0,15 mM-10 μM-63 μM-34,5 mM- 9,8 μM-1,3 μM- 2,67 μM respectively.

Bu çalışmada, İnci Kefali (Chalcalburnustarichi) böbrek dokusundan GST (EC.2.5.1.18) enzimi saflaştırıldı. Saflaştırılan GST enzimi aktivitesi üzerindeki yüksek toksisiteli metil civa, bazı ağır metal iyonları ve pestisitlerin etkileri incelendi. Saflaştırma işlemi, homojenat hazırlanması ve Glutatyon-Agaroz afinite kromatografisi olmak üzere iki safhada gerçekleştirildi. Enzim aktivitesi Awasthi yöntemine göre 340 nm'de absorbans artışına göre spektrofotometrik olarak ölçüldü. Enzim, %89'luk bir verim ile 335 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE yapıldı. Saflaştırılan enzimin her bir subsrat için Km ve Vmax değerleri çalışıldı. GSH subsratı için Km: 0,276 mM, Vmax ise 0,161 EÜ/ml olarak CDNB substratı için Km: 0,429mM, CDNB Vmax ise 0,207 EÜ/ml olarak belirlendi. Enzim aktivitesine etki eden Cu2+, Cr3+, Zn2+, Fe3+, Mg2+, Metil cıva, atrazine, diniconazole ve methomyl IC50 değerleri sırasıyla 2,4 μM-1,5 μM-0,15 mM-10 μM-63 μM-34,5 mM, 9,8 μM-1,3 μM-2,67 μM olarak bulundu.