The emergence of acquired metallo-beta-lactamases (MBLs) is of clinical concern since they confer resistance to all available beta-lactams except aztreonam. This study had been undertaken for detecting the ability of Klebsiella species and Enterobacter cloacea to produce inhibitor-resistant Temoniera beta-lactamases (IRT) and metallo-β-lactamase. Further, for determining the genetic elements encoding for such enzymes whether chromosomally or conjugated plasmid mediated. Furthermore, for detect the potency of some curing agents on conjugated plasmids DNA. The study was performed on 75 wound patients admitted to Department of Surgery, Ramadi Teaching Hospital during the period from February to July, 2010. Rapid iodometric β-lactamase production test in addition to phenotypic and confirmatory tests for production of IRT, and metallo-β-lactamase were performed. Plasmid DNA extraction, conjugation and curing experiments were performed. Our result showed that Fourty isolates were bacteriologically identified as Klebsiellae spp. including 26 (34.7%) Klebsiellae pneumoniae and 14 (18.7%) Klebsiellae oxytoca, 10 (13.3%) Enterobacter cloacea, and etc. In the screening test for IRT production, 6 (24%) isolates of K. pneumoniae were resistant to inhibition by clavulanic acid. In the screening test for metallo-beta-lactamase production, the study revealed that 1(10%), 1(4%) isolates of Klebsiella oxytoca and K. pneumoniae respectively were produced this enzyme. In the genetic part of study, Five (83.3%) of inhibitor-resistant TEM β-lactamase and 2 (100%) of metallo-β-lactamase producer isolates of Klebsiella spp., were plasmid mediated while the remaining were chromosomally mediated. The result of curing experiments showed successful curing for all the study isolates by both methods. The study suggested that the production of β-lactamases of type IRT, and metallo appeared to be the major mechanisms of resistance of Klebsiellae spp. and Enterobacter cloacea to β-lactams. Also, conjugative plasmids were found to be the main genetic elements encoding for such enzymes produced by these bacteria. Finally, the study suggested that sodium dodecyl sulphate was of higher potency than elevated growth temperature in the curing of plasmid DNA.

ان الهدف من الدراسة هو لتحديد قابلية بكتريا الكلبسيلا والانيروباكتر كلوشيا على انتاج انزيمات البيتالاكتاميز من نوعي تيمونيرا والميتالوبيتالاكتاميز وتحديد العناصر الوراثية المشفرة لإنتاجها سواء كانت كروموسومات او بلازميدات مقترنة بالاضافة الى تأثير العوامل المحيدة في تحييد البلازميدات المقترنة. اجريت الدراسة على 75 من مرضى الجروح الداخلين الى قسم الجراحة في مستشفى الرمادي التعليمي. تم اجراء طريقة اليود السريعة بالاضافة الى الاختبارات المظهرية والمؤكدة لتحديد انتج الانزيمات اعلاه. انجزت تجارب استخلاص الحمض النووي البلازميدي والاقتران والتحييد. تم عزل اربعون عزلة من بكتريا الكلبسيلا مقسمة الى 26 (34.7%) بكتريا الكلبسيلا الرئوية و 14 (18.7%) للكلبسيلا اوكسيتوكا تليها بكتريا الانتيروباكتر كلوشيا 10 (13.3%). اظهر اختبار المسح لأنزيمات التيمونيرا بيتالاكتاميز بان 6 (24%) من بكتريا الكلبسيلا الرئوية بان كانت مقاومة للتثبيط باستخدام حمض الكلافيولانك فيما اظهر اختبار المسح انتاج انزيمات الميتالو من قبل عزلة واحدة من بكتريا الكلبسيلا الرئوية واخرى من الكلبسيلا اوكسيتوكا. اظهر اختبار التحليل البلازميدي بان خمس عزلات كلبسيلا (83.3%) من مجموع ستة منتجة لأنزيمات تيمونيرا وكافة عزلات الكلبسيلا المنتجة لأنزيمات الميتالو كانت مشفرة بواسطة بلازميدات. كما اظهرت تجارب التحييد نجاح طريقتي التحييد المستخدمة في الدراسة. تستنتج الدراسة بان انتاج الانزيمات من كلا النوعين كان الية رئيسية في مقاومة كلا من بكتريا الكلبسيلا والانتيروباكتر كلوشيا لمضادات البيتالاكتام. كذلك فان البلازميدات المنتقلة بالاقتران الجنسي كانت العنصر الوراثي الرئيسي المشفر لإنتاج انزيمات الدراسة. أخيرا تستنتج الدراسة بان مادة سلفات دوديسيل الصوديوم اظهرت كفاءة اعلى من طريقة درجة حرارة النمو المتزايدة في تحييد الحمض النووي البلازميدي.